ELISA.

ELISA.

El examen de ELISA es una de las pruebas más eficaces para detectar el virus del VIH.

Es una técnica de inmunoensayo en la cual un antígeno inmovilizado se detecta mediante un anticuerpo enlazado a una enzima capaz de generar un producto detectable, como cambio de color o algún otro tipo; en ocasiones, con el fin de reducir los costos del ensayo, nos encontramos con que existe un anticuerpo primario que reconoce al antígeno y que a su vez es reconocido por un anticuerpo secundario que lleva enlazado la enzima anteriormente mencionada. La aparición de colorantes permite medir indirectamente mediante espectrofotometría el antígeno en  la muestra.

Que es un inmunoensayo.

Inmunoensayo es un conjunto de técnicas inmunoquimicas analíticas de laboratorio que tienen en común usar complejos inmunes, es decir los resultantes de la conjugación de anticuerpos y antígenos, como referencias de cuantificación de un analito determinado, que puede ser el anticuerpo (Ac) o un antígeno (Ag), usado para la medición una molécula como marcador que hace parte de la reacción con el complejo inmune en la prueba o ensayo químico.

Los inmunoensayos se diferencian de otros tipos de pruebas de laboratorios (como las colorimétricas) ya que usan complejos Ac-Ag para generar una señal que pueda medirse.

Antígeno (Ag).

Molécula exógena, que se encuentra en la superficie de un agente patógeno, y que al entrar en contacto con el organismo, induce la producción de una respuesta del sistema inmune especifica (formación de Acs).

Anticuerpo (Ac).

Proteína producida como respuesta a una sustancia extraña (Ag) y tiene la capacidad de combinarse con el (complejo Ag-Ac).

Tipos de Elisa.

ELISA no competitivo.

Consiste en enfrentar la muestra con el Ag o Ac que está en la fase sólida. Si una muestra es positiva se formara el complejo Ag-Ac, y al agregar el conjugado reaccionara con el respectivo sustrato desarrollando color.

-       Directo detectan Ag.

-       Indirecto detectan Ac.

-       Elisa de sándwich.

ELISA competitivo.

El Ac de la muestra va a competir con el conjugado por un número limitado de sitios de unión del Ag. Habrá ausencia de color en una muestra positiva debido a que el sustrato no encontrara a la enzima porque el conjugado ha sido desplazado por el Ac presente en la muestra.

Pasos generales.

1.    Tapizado de pocillo con el Ag – Ac.

2.    Adición de la muestra problema con la muestra Ags . Acs.

3.    Unión del Ag – Ac especifico al Ag o Ac tamizado en el pocillo.

4.    Lavado del pocillo para eliminar el exceso del Ag o Ac no unido.

5.    Adición del Ac secundario marcado por la enzima.

6.    Unión del Ac secundario al Ag o Ac.

7.    Lavado del pocillo para eliminar el exceso enzima no unida.

8.    Adición del sustrato.

9.    Unión del sustrato a la enzima.

10.  Coloración.

   ELISA DIRECTO.

   

   ELISA INDIRECTO.

  

   En este video nos explican en que consiste la prueba de ELISA.