Diluciones.

DILUCIONES.

La dilución es el procedimiento que se sigue para preparar una dilución menos concentrada a partir de una más concentrada.

En general podemos decir que una dilución es una mezcla homogénea, uniforme y estable, formada por dos o más sustancia denominadas componentes. La sustancia presente en mayor cantidad suele recibir el nombre de solvente, y a la menor cantidad se llama soluto y es la sustancia disuelta. El soluto puede ser un gas, un líquido o un sólido, y el disolvente puede ser también un gas, un líquido o un sólido.

Soluto: es el componente que cambie de fase cuando se produce la disolución; también denominado cuerpo disperso, este determina las propiedades químicas de la solución y generalmente se encuentra en menor proporción.

Solvente: es el componente que disuelve, teniendo la propiedad de disolver ciertas propiedades, este actúa como medio dispersante para el soluto, disuelve el soluto y generalmente se encuentra en mayor cantidad.

Como se expresan

Una parte de una solución original con respecto a las partes totales del volumen final

1:10 (una parte del soluto + 9 partes del solvente)

5% (v/v) [5 ml del soluto + 95 ml del solvente]

5% (w/v) [5 gr del soluto + 95 ml del solvente]

Clasificación  de diluciones

.

Diluciones según su concentración.

Diluidas o insaturada: son las que tienen una pequeña cantidad de soluto en un determinado volumen de disolución.

Concentradas o saturadas: son aquellas que tienen gran cantidad de soluto en un determinado volumen de disolución y por tanto, están próxima a la saturación.

Supersaturadas: son las que contienen más soluto que el presente de las disoluciones saturadas.

Según su estado físico.

Soluciones solidas: son las aleaciones de los metales.

Ejemplo

Bronce – acero – latón –metal.

Diluciones liquidas.

Existe el sólido en líquido como lo es el azúcar en agua o sal en agua.

Liquido en líquido como el alcohol en agua.

Gas en líquido como lo son las bebidas gaseosas. 

Diluciones gaseosas

·         Aire

·         Smog.

Tipos de diluciones.

Diluciones seriadas: Sucesión de diluciones con incrementos progresivos y regulares, en los cuales el factor de dilución siempre es igual.

            1:2      1:4      1:8      1:16    1:32    1:64    1:128….         1:10    1:100              1:1000   1:10000……..

            10^-1       10^-2                 10^-3                      10^-4………

Fórmula para hacer cualquier dilución.

1. debo pasar una solución 1:5 a una concentración 1:25

            25/5 = 5, entonces 1 parte de la solución 1:5 + 4 partes del solvente

2.  Preparar 750 ml una dilución 1:10 de HCl a partir del HCl comercial

Concentración que tengo HCl comercial 1:1    Solución pura del soluto

Concentración  que necesito HCl 1:10

            10/1= 10, entonces 1 parte HCl+9 de H₂O

            VF 750 ml

            10ml de sln   ----       1ml de HCl

            750 ml            ----       X

            75 ml de HCl + 675 ml de H₂O

Diluciones no seriadas.

Sucesión de diluciones con aumentos progresivos, no regulares, en los cuales cada dilución es menos concentrada que la anterior en una proporción no conocida, por ejemplo

        1:2          1:8      1:64    1:2000

-          Preparar 1:5     1:10    1:30 y obtener un VF de 1.5 ml

        1:5  1ml  ---- 5VF

                    X   ---- 1.5 VF                = 0.3 ml de soluto

                                                              1.2 ml de solvente

    1:10 a partir de 1:5  = hacer una dilución 1:2

                  1ml (1:5) ----- 2ml VF

                     x          -----  1.5 VF      = 0.75 ml (dil 1:5)

                                                              0.75 ml de solvente

        1:30 a partir de 1:10 = hacer una dilución 1:3

                  1ml (1:10) --- 3 ml VF

                        x         --- 1.5 ml VF  = 0.5 ml (dil 1:10)

                                                                          1 ml del solvente

Soluciones independiente.

Soluciones que no poseen ningún factor de dilución y se resuelven con la formula ViCi = VfCf

- Que cantidad de metanol al 95% necesito para preparar 2 litros de metanol  al 60%

        

         Vi ?, Ci 95%, Vf 2 litros, Cf 60%

         Vi = (2 litrosx60%)/95% = 1.26 lt metanol al 95% + 740 ml de H₂O destilada

Otras soluciones.

Molaridad (M)  

       

La concentración molar de una solución se define como el número de moles del soluto por litro de solución. Molaridad = Moles de soluto /litros de solución.

m = molaridad  =          moles de soluto

                        

                        ----------------------------------------------   m = n / kg

                           

                                Masa de disolvente (kg)

Normalidad (N)

La concentración normal o normalidad de una solución se define como el numero de equivalentes gramo de soluto por litro de solución 1 eq-gr= MW/Valencia (Iones reactivos en el soluto)

N  =  normalidad =          n° Eq                            n*  Eq   = masa

                           --------------------------------------                 -----------------

                                 1 litro de disolución                            mEq

ELISA.

ELISA.

El examen de ELISA es una de las pruebas más eficaces para detectar el virus del VIH.

Es una técnica de inmunoensayo en la cual un antígeno inmovilizado se detecta mediante un anticuerpo enlazado a una enzima capaz de generar un producto detectable, como cambio de color o algún otro tipo; en ocasiones, con el fin de reducir los costos del ensayo, nos encontramos con que existe un anticuerpo primario que reconoce al antígeno y que a su vez es reconocido por un anticuerpo secundario que lleva enlazado la enzima anteriormente mencionada. La aparición de colorantes permite medir indirectamente mediante espectrofotometría el antígeno en  la muestra.

Que es un inmunoensayo.

Inmunoensayo es un conjunto de técnicas inmunoquimicas analíticas de laboratorio que tienen en común usar complejos inmunes, es decir los resultantes de la conjugación de anticuerpos y antígenos, como referencias de cuantificación de un analito determinado, que puede ser el anticuerpo (Ac) o un antígeno (Ag), usado para la medición una molécula como marcador que hace parte de la reacción con el complejo inmune en la prueba o ensayo químico.

Los inmunoensayos se diferencian de otros tipos de pruebas de laboratorios (como las colorimétricas) ya que usan complejos Ac-Ag para generar una señal que pueda medirse.

Antígeno (Ag).

Molécula exógena, que se encuentra en la superficie de un agente patógeno, y que al entrar en contacto con el organismo, induce la producción de una respuesta del sistema inmune especifica (formación de Acs).

Anticuerpo (Ac).

Proteína producida como respuesta a una sustancia extraña (Ag) y tiene la capacidad de combinarse con el (complejo Ag-Ac).

Tipos de Elisa.

ELISA no competitivo.

Consiste en enfrentar la muestra con el Ag o Ac que está en la fase sólida. Si una muestra es positiva se formara el complejo Ag-Ac, y al agregar el conjugado reaccionara con el respectivo sustrato desarrollando color.

-       Directo detectan Ag.

-       Indirecto detectan Ac.

-       Elisa de sándwich.

ELISA competitivo.

El Ac de la muestra va a competir con el conjugado por un número limitado de sitios de unión del Ag. Habrá ausencia de color en una muestra positiva debido a que el sustrato no encontrara a la enzima porque el conjugado ha sido desplazado por el Ac presente en la muestra.

Pasos generales.

1.    Tapizado de pocillo con el Ag – Ac.

2.    Adición de la muestra problema con la muestra Ags . Acs.

3.    Unión del Ag – Ac especifico al Ag o Ac tamizado en el pocillo.

4.    Lavado del pocillo para eliminar el exceso del Ag o Ac no unido.

5.    Adición del Ac secundario marcado por la enzima.

6.    Unión del Ac secundario al Ag o Ac.

7.    Lavado del pocillo para eliminar el exceso enzima no unida.

8.    Adición del sustrato.

9.    Unión del sustrato a la enzima.

10.  Coloración.

   ELISA DIRECTO.

   

   ELISA INDIRECTO.

  

   En este video nos explican en que consiste la prueba de ELISA.

                            

nefelometria

Nefelometría.

Se basa en la detección de los complejos Ag-Ab, por la refracción que dichos complejos producen sobre rayos de luz que se hacen pasar por el tubo con el antígeno y el anticuerpo correspondiente. Habitualmente se utilizan rayos laser y se establece una relación entre la cantidad de luz que llega y a la cantidad de complejos formados. 

La nefelometría es un procedimiento analítico que se basa en la dispersión de la radiación que atraviesan las partículas de materia. Cuando la luz atraviesa un medio transparente  en el que existe una suspensión de partículas sólidas, se dispersa en todas direcciones y como consecuencia se observa turbia. La dispersión no supone la pérdida neta de potencia radiante, solo es afectada la dirección de la propagación, porque la intensidad de la radiación es la misma en cualquier angulo.

La intensidad depende de: el número de partículas suspendidas, su tamaño, su forma, los índices refractivos de la partícula y del medio dispersarte, y la longitud de onda de la radiación dispersada. La relación entre variables y es más factible un tratamiento teórico, pero debido a su complejidad raras veces se aplica a problemas analíticos específicos.

Procedimiento analítico

Se basa en la dispersión  de la radiación que atraviesan las partículas de materia. Cuando la luz atraviesa un medio transparente en el que existe una suspensión de partículas sólidas, se dispersa en todas direcciones y como consecuencia se observa turbia. La dispersión no supone la pérdida neta de potencia radiante, solo es afectada la dirección de la propagación, porque la intensidad de la radiación es la misma en cualquier angulo.

La intensidad depende del número de partículas sus pendidas, su tamaño, su forma, los índices refractivos de la partícula y del medio dispersante, y la longitud de onda de la radiación dispersada. Cuando la concentración de una suspensión de partícula es baja es preferible medirla por este método.

Nefelómetro

Un nefelómetro es un instrumento para medir partículas suspendidas en un líquido. Esto lo hace empleando una fotocelda colocada en un ángulo de 90° con respecto a una fuente luminosa. La densidad de partículas es entonces una función de la luz reflejada por las partículas a la fotocelda. Cuanta más luz se refleje en una determinada densidad de partículas depende delas propiedades de las partículas como su forma, color y reflectividad. Estableciendo a una correlación de trabajo entre turbidez y solidos suspendidos  (que más útil, pero generalmente una más difícil de cuantificación de partículas) debe ser establecido independientemente para cada situación. 

Turbidimetria.

Turbidimetria.

La turbidimetría mide la disminución de la luz transmitida a través de una suspensión de partículas utilizando para ello un espectrofotómetro (detector en la misma dirección del haz de luz, se mide A o T). Se suele utilizar para soluciones concentradas (para que haya una buena disminución de la luz transmitida) ejemplo:

Determinación de proteínas totales en suero o en  orina (haciendo que las proteínas precipiten con ácido sulfosalicílico).

Turbidimetría fundamento.

La turbidimetría puede realizarse en espectrofotómetros de visible o violeta. Cuando la concentración de partículas en suspensión se mide por turbidimetría, la suspensión se pone en una cubeta similar a un tubo de ensayo, que permite realizar las medidas de las energía incidentes y transmitidas. La fuente de radiación más frecuentemente usadas es la lámpara dewolframio, pero pueden utilizarse otras fuentes de radiación visible. Si ponemos en la cubeta suspensiones coloreadas se debe usar un filtro para evitar que influya sobre los resultadosdando valores excesivamente altos.  Los Turbidímetros pueden incorporar cualquier detectorque sea sensible a la longitud de onda transmitida.

La turbidimetría tiene una gran variedad de aplicaciones y permite trabajar con muestras gaseosas, liquidas e incluso con sólidos transparentes. La formación deprecipitados difíciles de filtrar, como por ejemplo los gelatinosos o los de tamaño de partícula muy pequeño, suelen proporciona suspensiones ideales para la aplicación de técnicas basadasen la dispersión de la luz que sustituye a las técnicas gravimétricas. Este tipo de aplicaciones son frecuentes en laboratorios analíticos, laboratorios clínicos y en plantas de procesos. Uno de los principales campos de aplicación reside en estudios de polución de aire y agua, donde las dos técnicas se usan para determinar la transparencia y controlar el tratamiento de aguas potables, e fluentes de plantas de tratamiento de aguas y otros tipos de aguas ambientales.

Las medidas de dispersión de la luz se utilizan también para determinar la concentración de humos, polvo, niebla, aerosoles, etc. A pesar de que los términos turbidimetría y nefelometría suelen restringirse a aquellas aplicaciones en las que se mide la concentración de partículas en suspensión existen también otros tipos de aplicaciones basados en las medidas de dispersión de la luz. Entre ellas podemos citar la determinación de la forma y tamaño de las partículas así como la de los pesos, moleculares (especialmente en el caso de polímeros).

¿Cómo diferenciar la turbidimetría y la nefelometría?

Cuando la luz atraviesa un medio transparente en el que existe una suspensión de partículas sólidas, se dispersa en todas direcciones y como consecuencia se observa turbia. La turbidez es la propiedad óptica de una muestra que hace que la radiación sea dispersada y absorbida más que transmitida en línea recta a través de la muestra. La turbidez es ocasionada por la presencia de materia suspendida en un líquido.

Hay dos métodos para medir la turbidez de una muestra, la turbidimetría y la nefelometría. Son dos técnicas complementarias que seutilizan para el análisis cuantitativo de disoluciones coloidales, emulsiones, humos o nieblas.

La dispersión no supone la pérdida neta de potencia radiante, solo es afectada la dirección dela propagación, porque la intensidad de la radiación es la misma en cualquier ángulo. En la turbidimetría se compara la intensidad del rayo de luz que emerge con la del que llega ala disolución. En cambio, en la nefelometría la medida de la intensidad de luz se hace con un ángulo de 90º con respecto a la radiación incidente. El instrumento usado en la nefelometría, el nefelómetro se asemeja al fluorómetro. En cambio en turbidimetría se utiliza el turbidíemetro que es un fotómetro de filtro.

Electroforesis.

Electroforesis.

 La electroforesis es un método de laboratorio en el que se utiliza una corriente eléctrica controlada con la finalidad de separar biomoleculas según su tamaño y carga eléctrica a través de una matriz gelatinosa.

También es una técnica para la separación de moléculas que se basa en la migración de solutos iónicos bajo la influencia de un campo eléctrico; estas partículas migran hacia el cátodo o ánodo, en dependencia de una combinación de su carga, peso molecular y estructura tridimensional, la ventaja de la electroforesis es la separación, visualización y cuantificación del número de proteínas de una solución, pero esta también afecta la estructura de las proteínas por lo tanto, afecta a la función de la misma.

Métodos electroforéticos zonales.

Son los más comunes, dada su alta aplicabilidad en diferentes campos. Son útiles para lograr la separación de mezclas complejas. Se aplican pequeñas cantidades de la disolución de proteínas a un soporte sólido, que se impregna con una solución tampón. Los  soportes son en general polímeros y forman un gel poroso que restringe el movimiento de las moléculas a través del medio durante la electroforesis y disminuyen los flujos  de convección del solvente. 

 Como soporte han sido utilizados papel (celulosa), almidón, poliacrilamida, agarosa y acetato de celulosa, entre otros.  Este método tiene gran poder resolutivo por que se aplica una cantidad pequeña de proteína a una zona estrecha, mientras que la  longitud del trayecto es mucho mayor  que la zona de aplicación. El equipamiento requerido es simple, fuente de poder,  cubeta vertical u horizontal donde se colocan el soporte y dos electrodos.

Electroforesis en gel  de poliacrilamida.

 Los geles de poliacrilamida se forman por  polimerización de la acrilamida por acción de un agente entrecuzador, es químicamente inerte, de propiedades uniformes, capaz de ser preparado de forma rápida y reproducible. Forma, además, geles transparentes con estabilidad mecánica, insolubles en agua, relativamente no iónicos y que permiten buena visualización de las bandas durante un tiempo prolongado. Además tiene la ventaja de que variando la concentración de polímeros, se puede modificar de manera controlada en el tamaño del poro, lamentablemente cada vez se emplea menos en diagnostico debido a su neurotoxocidad.

Electroforesis en geles de agarosa.

 La agarosa es un polisacárido (originalmente obtenido de algas, como el agar-agar, pero de composición homogénea), cuyas disoluciones (típicamente de 0.5 a 2 %) poseen la propiedad de permanecer liquidas por encima de 50 grados C y formar un gel, semisólido al enfriarse. Este gel está constituido por una matriz o trama tridimensional de fibras poliméricas embebida en gran cantidad de medio líquido, que retarda el paso de las moléculas, se usa usualmente para separar moléculas grandes de alrededor 20.000 nucleótidos.

Factores que afectan la electroforesis.

-       Carga neta.

-       Tamaño.

-       Intensidad del campo eléctrico.

-       Temperatura.

-       Medio soporte.

-       Buffer.